摘抄：外泌体是一种由细胞主动分泌的纳米级脂质双层囊泡，其腔内或脂质双分子层中包裹着卵白质、脂质和核酸等多种生物因素。外泌体具有低免疫原性、高物理化学安逸性、高组织穿透能力，以及先天的输送能力，因此有望成为一类新式的药物寄递载体。面前，外泌体行为药物寄递载体的筹商已取得了可喜的进展，关连外泌体折柳以及提高其药物负载和寄递效用的新要领不停深切。然而，仍有很多疼痛制约了外泌体的临床应用。综述了外泌体行为药物寄递载体的筹商进展，对外泌体大范围分娩和纯化中的时间难点进行了分析，并回顾了外泌体用于药物寄递的律例问题。1 外泌体简介细胞外囊泡（extracellular vesicle，EV），根据大小、功能、起原的不同，可分为 3 种类型：外泌体、微囊泡和凋一火小体。外泌体是多囊泡体与细胞膜交融后分泌的直径为 30 ~ 150 nm 的 EV，微囊泡是细胞膜通过出芽径直零碎的直径为 100 ~ 1 000 nm 的 EV，凋一火小体是细胞在凋一火过程中开释的直径为 50 ~ 5 000 nm 的 EV。EV 是由大多数细胞通过多种机制形成的异质性细胞繁衍囊泡。EV 通过多种体液（如血液、淋巴液、唾液、脑脊液、尿液、乳汁和支气管肺泡灌洗液）向相应的靶细胞传递生物信号，这些信号包括种种非编码 RNA、编码 RNA、DNA 链、卵白质和脂质。EV 行为疾病的生物记号物和药物寄递载体备受存眷，这种存眷主要集会在 EV 的一种弥留亚型-外泌体。检测外泌体记号物八成及时动态地反应患者的疾病景色，因此在疾病的早期筛查、无创会诊、疗效监控、缓助用药等范围有着广袤的应用出息。此外，外泌体行为药物的潜在载体，在肿瘤等疾病的调治中也展现出巨大的后劲。然而，在粒径范围、内含物类型和生物学功能等方面，EV 亚群存在不同进程的重复与区别。迄今为止，外泌体的折柳要领尚无公认的“金圭臬”。由于时间的舍弃，岂论经受何种要领，皆无法将外泌体与其他EV 亚群绝对折柳，因此，面前在寄递载体方面的筹商和应用中，外泌体常与其他 EV 亚群夹杂使用。哺乳动物和植物细胞均能产生外泌体。外泌体是一个具有高度异质性的群体，其异质性表当今多个方面，包括大小异质性、包含物异质性、功能异质性和细胞起原异质性。不同细胞起原的外泌体其大小、名义受体和内容物往往具有不同特征。细胞靶向分子、细胞黏附分子、代谢物和核酸等在外泌体的形成过程中被包裹在囊泡腔内或脂质双层内，但由于细胞所处的微环境及内在生物特征的相反，外泌体所含物资的种类和数目也不尽疏通。外泌体对靶细胞的作用也可能存在相反，这种功能异质性可能指令细胞凋一火、免疫调整等不同生物学反应。器官组织（岂论是否是肿瘤组织）所具有的特殊性质也可能导致外泌体的异质性。这些特征的不同组合使外泌体呈现出复杂的异质性，并赋予其指令复杂生物学反应的独到能力。 从结构上看，外泌体具有单层膜的结构，其水性中枢周围被脂质双分子层所环绕，同期在其腔内或脂质双分子层中包裹了多种生物因素，如卵白质、脂质和核酸等（见图 1）。当外泌体被用作药物寄递系统时，疏水性药物可分散在其脂质双分子层内，而亲水性药物则扩散到外泌体的腔内。从载药机制的角度来看，由于外泌体药物寄递系统的结构与脂质体不异，因此可将其视为与脂质体性质稀奇的药物载体。同期，基于其穿透能力强、血液轮回时刻长、生物相容性好、生物分散广等独到优点，外泌体有望成为一种比脂质体更具上风的自然药物载体。2 外泌体行为药物载体的筹商近况外泌体行为自然的药物寄递载体，可通过基因工程和化学修饰来提高药物靶向细胞或器官的能力，从而舍弃药物对正常组织和细胞的伤害，减轻药物毒反作用。外泌体载药时间分为两类：外源性载药时间和内源性载药时间。外源性载药时间系从细胞培养液或其他生物体液平折柳和纯化外泌体，并通过物理或化学技能将所需药物负载至外泌体名义或里面；而内源性载药时间系通过生物工程时间改进的形态使供体细胞产生包含特定药物的外泌体。行为药物载体，外泌体八成以高效且特异的形态将药物分子寄递到靶细胞，为疾病的靶向调治提供了一种新的想路和实用的时间。然而，由于这是一项新的发现，尚未进行临床评估，外泌体行为药物寄递系统的应用还濒临着很多阻碍和疼痛。面前存在的主要问题包括：外泌体纯化的劣势、表征的不及、负载效用低、靶向性差以及需要克服外泌体异质性。此外，新式外泌体药物投入临床纯熟前需要恰当细密分娩范例（good manufacturing practice of medical products，GMP）的圭臬，以确保其质料和一致性。外泌体的GMP分娩主要触及以下 3 个方面：细胞培养系统上游、纯化系统下流和外泌体质料适度。由于外泌体是由细胞产生的，因此不错诳骗大范围细胞培养时间来构建分娩系统。由于宿主细胞分泌囊泡的颗粒大小和特征与病毒不异，下流纯化系统想象情况下应革职病毒类疫苗制造的过程。质料适度是外泌体 GMP 分娩濒临的一浩劫题。尽管先前的筹商也曾对外泌体的符号物进行了表征，但产生外泌体的细胞类型各不疏通。面前对外泌体的评估大多数集会在临床前或临床筹商中的分娩和使用上，针对外泌体质料适度的律例和带领原则尚未出台。本文先容了来自东说念主类和植物、用于调治筹商的外泌体，并对外泌体行为药物寄递载体的筹商进展进行回顾。3 外泌体关连药物的临床纯熟进展外泌体行为一种以囊泡体式存在的新式寄递系统，在多种疾病的调治中有着平凡的应用出息。在基于外泌体的东说念主类临床筹商中，外泌体关连药物的生物相容性、实用性和安全性是现时亟需先进时间技能来科罚的一个弥留课题。在临床纯熟中，起原于植物和东说念主类细胞的外泌体被用于种种调治环境的筹商。越来越多的生物时间公司正在开发基于东说念主类/ 植物起原外泌体的疗法，以科罚种种疗法的药物寄递问题，其中包括 Evox Therapeutics、Carmine Therapeutics、Exopharm、Aruna Bio、Capricor Therapeutics 和Mantra Bio 等公司。其开发的疗法涵盖了小分子疗法、卵白质疗法、RNA 疗法、病毒基因疗法，以致是基于成簇的规则断绝的短回环重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）时间的基因裁剪用具疗法范冰冰 女同，展现了外泌体在药物寄递范围的种种化应用。大型医药公司与领有外泌体更变时间平台的新兴企业之间的互助日益加多范冰冰 女同，推进了基于外泌体的调治要领的临床纯熟不停深切。面前，多项外泌体关连临床筹商正处于运筹帷幄或纯熟阶段，已有的筹商收尾高傲，外泌体调治是安全且耐受性细密的。外泌体在多种疾病的会诊和调治中皆展现出细密的应用后劲，包括新式冠状病毒感染（COVID-19）、癌症和免疫性疾病等。表1 回顾了基于外泌体的种种疗法的临床纯熟信息。 4 外泌体药物载体在大范围分娩和纯化中的近况与问题外泌体行为药物寄递载体的应用受到多种因素的影响，包括起原、装载形态及转运能力等，其中，枯竭高效、均匀的载药要领是制约外泌体临床应用的弥留因素。此外，监管机构尚未发布对于若何测试外泌体的安全性和灵验性的带领认识，因此若何对外泌体关连药物进行安全性和灵验性考据，并成就恰当 GMP 圭臬的外泌体分娩制备工艺，是面前亟待科罚的问题。针对面前外泌体在临床应用中存在的问题，本章节将对外泌体的起原、外泌体装载时间和分娩管制进行详细，以期为外泌体的筹商与应用提供新想路。4.1 药用外泌体的起原及质料适度问题4.1.1 药用外泌体的起原 外泌体是一种生物成品，可起原于多种类型的细胞，包括免疫细胞、癌症细胞和干细胞等，同期也可起原于多种生理液体，如血液、脑脊液、胆汁、羊水、腹水、母乳、尿液、精液和唾液等。面前可通过GMP 级大范围分娩取得的动物起原外泌体主要包括：骨髓MSC 外泌体、脂肪MSC 外泌体、树突状细胞外泌体、东说念主类胚胎肾细胞 293（也称 HEK293）细胞外泌体和牛奶外泌体等。MSC 是一种特定类型的干细胞，由于其具有多谱系分化的潜能，对再生和归附至关弥留。MSC 具有分化为肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和内皮细胞等多种组织细胞的能力。东说念主类脐带、脂肪组织、骨髓和胚胎是弥留的 MSC 起原。MSC 不错从多种东说念主体组织平折柳并具有显赫的离体增殖能力，因此被视为制备调治性外泌体的弥留起原细胞。Mendt 等开发了一种基于 GMP 圭臬的可范围化的外泌体索求要领，该要领系从东说念主骨髓源性 MSC（human bone marrow mesenchymal stem cell，hBM-MSC）中索求外泌体，其产量是东说念主包皮成纤维细胞的 3 倍。使用 hBM-MSC 起原的外泌体调治的最常见疾病是软骨格外或骨关节炎，hBM-MSC 起原的外泌体已被解释可靶向骨骼并刺激成骨分化。由东说念主脂肪组织繁衍的MSC（human adipose derived MSC，hAD-MSC）产生的外泌体已被解释具有多种活性，如促进组织愈合、减少毁伤和抗炎。脂肪组织可从健康成年捐赠者的腹部和臀部的脂肪组织中获取，并可通过使用特定的培养基对脂肪组织中的MSC 进行筛选和培养。免疫细胞产生的外泌体也备受筹商东说念主员的存眷。免疫细胞炎症是一种保护躯壳免受感染或毁伤的免疫反应，然而，不受适度的炎症可能导致多种疾病。炎症的基本介质是先天免疫分子，如细胞因子、趋化因子和先天免疫细胞等。外泌体行为一种调治免疫系统过度活跃的更变疗法越来越受到迎接。树突状细胞（dendritic cell，DC）和巨噬细胞产生的外泌体已被解释具有抗免疫团结作用，DC 产生的外泌体可通过肽-主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC） 激活CD4+ 或CD8+ T 细胞，从而指令细胞产生适合性免疫反应。HEK293 细胞因其高转染效用、易于培养和多半产生外泌体的能力，行为外泌体供体被平凡应用于种种筹商。与干细胞比较，HEK293 细胞系的大范围培养条款相对完善、时间愈加老练。尽管最先的 HEK293 细胞系是一个贴壁细胞系，但筹商东说念主员通过驯化也曾成就了很多八成进行悬浮培养的HEK293 繁衍的细胞系， 如 HEK293S、HEK293F 等。此外，HEK293 还被平凡应用于生物药物的分娩，对该细胞系使用最常见的转染试剂八成发达出高转染效用，同期该细胞系滋长速度高、推陈出新快，能在短时刻内产生多半重组卵白。更弥留的是，HEK293 细胞八成产生与东说念主类自身合成卵白质最不异的卵白质，具有较低的免疫原性，是一种分娩卵白或多肽类药物的想象用具。牛奶中富含丰富的养分物资，如卵白质、钙和维生素 D 等，是均衡膳食中不能或缺的弥留组成部分。牛奶起原的外泌体具备多项上风。第一，牛奶起原的外泌体适用于范围化分娩。由于牛奶易得，且其繁衍的外泌体具有高产率、无细胞毒性等优点，在分娩老本、安全性、安逸性和可用性方面具有独到上风。第二，牛奶起原的外泌体自己具备调治效果。牛奶起原的外泌体生物相容性高、免疫原性低，同期具备在胃消化过程中保握自身无缺的能力、通过胃肠说念内吞作用投入血液的能力、将其所含卵白质和 microRNA 转机到免疫细胞的能力以及适度免疫反应和滋长的能力。筹商标明，牛奶起原的外泌体可减轻关节炎症。第三，牛奶起原的外泌体也适用于口服药物的开发，举例诳骗牛奶起原外泌体负载紫杉醇，其口服给药发达出比打针紫杉醇更低的毒性和不良反应。行为纳米级药物载体，牛奶起原的外泌体口服给药的生物利费用稀奇可不雅。植物起原的外泌体体积小、组织穿透性强，在不同的酸碱度和温度下皆能督察较好的理化安逸性，是一种想象的药物寄递载体。面前，公开报说念的植物起原外泌体包括葡萄外泌体、生姜外泌体、芦荟外泌体、东说念主参外泌体、甘草外泌体、红景太空泌体、西蓝花外泌体、葡萄柚外泌体、小麦外泌体、大蒜外泌体、蒲公英外泌体、洋葱外泌体等。在功能方面，植物起原外泌体含有多种生物活性因素，赋予了其多种调治能力，包括保肝、抗肿瘤、抗氧化、抗炎和组织再生作用。举例，Ju等报说念葡萄起原的外泌体 GELN 不错穿过肠黏液层，靶向肠干细胞，指令肠干细胞的增殖，从而缓解葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate，DSS）指令的小鼠结肠炎。面前，ClinicalTrials.gov 上已能检索到多项关连植物外泌体的临床筹商。举例，一项Ⅰ期临床纯熟（NCT01668849）正在探索葡萄外泌体行为抗炎药物的应用价值，该筹商旨在详情其是否不错捣毁头颈部癌症患者在放化疗期间发生的口腔黏膜炎症。另外，一项编号为 NCT01294072 的临床筹商旨在探索植物外泌体若何能更灵验地将姜黄素寄递到健康的结肠组织和结肠癌组织中。口服姜黄素的生物利费用相配低，而使用植物外泌体或可灵验科罚姜黄素的寄递问题。4.1.2 药用外泌体的质料适度问题与脂质体和其他纳米载体比较，基于外泌体的寄递平台在相容性、安逸性、组织穿透性、靶向能力和固有生物活性等方面具有一定上风。外泌体的起原平凡，一方面为其索求带来了便利，但在另一方面，外泌体起原的种种性、其自己的异质性对外泌体制剂的质料形成了一定隐患。如安在起原上对外泌体进行严格适度，确保其可追忆性、安逸性及正当性，是面前外泌体类新药研发濒临的首要难题。根据不同亲本细胞的不同景色，外泌体在捎带核酸和卵白质方面具有高度异质性。不需要的分子可能会影响外泌体的功能，以致产生无益的反作用。为了确保外泌体在临床使用中的安全性，应严格适度外泌体起原（如物种、细胞类型和培养条款），并对其卵白质组学和基因组学进行精确、贤人和高通量的分析。其中，细胞起原的外泌体其分娩需革职GMP 圭臬，对细胞安全分娩的基本要求包括：有细胞集聚、加工、检定、保存和临床应用全过程的圭臬操作规范（standard operation procedure，SOP）和无缺的质料管制纪录；悉数这个词过程必须革职细胞家具性量适度（quality control，QC）圭臬，并领有与其配套的检测拓荒和检测要领；细胞库的细胞必须保证可溯源；按照批准的细胞家具性量适度圭臬对每批次细胞家具进行严格检测，包括细菌、真菌、支原体和内毒素的检测。在外泌体的折柳纯化过程中，相对平淡的尺寸范围导致外泌体与其他细胞外囊泡夹杂，从而收缩了外泌体的靶向能力，最终会对外泌体制剂的家具性量产生影响。因此，在外泌体的折柳纯化过程中，应采用适当的纯化要领，以取得尺寸均匀的外泌体亚群。此外，在小范围履行室应用中，不错使用传统时间来竣事外泌体的折柳，而在临床纯熟和药物开发的上游和下流操作中，则需要快速且可扩张的时间。传统的外泌体制备要领在大范围分娩上存在产量低、质料适度难、周期长、老本高的问题以过甚他时间问题。因此，在研发阶段，探索与成就恰当GMP 圭臬的外泌体制备时间、下流纯化时间和质料适度系统显得尤为弥留。在市集监管方面，岂论是国际照旧国内，外泌体市集均无明确监管框架。针对外泌体疗法，好意思国 FDA 在 2019 年发布了一份对于外泌体家具的内行安全声明，并在 2020 年发布了对于含有干细胞和外泌体的再生医疗家具的浮滥者警报。若何对这些名目进行分类是了然于目的：它们属于调治家具类别。到面前为止，监管机构还莫得发布若何对外泌体进行安全和灵验性测试的带领认识。但外泌体是细胞产物，其质料适度与带领原则可参照细胞家具关连原则。2017 年，原国度食物药品监督管制总局（China Food and Drug Administration，CFDA）发布了《细胞调治家具筹商与评价时间带领原则（试行）》，该带领原则对细胞调治过甚关连家具在使用血清过甚他物料、细胞库等方面存在的风险进行了评估带领。2022 年 8 月，我国牵头制定并发布干细胞国际圭臬 ISO24603，外泌体筹商也可参考该圭臬，以圭臬化外泌体分娩的上游重要。4.2 外泌体载药要领在将外泌体用作药物载体时，首要计划的是高效装载药物的策略。脂质双分子层的膜结构行为外泌体的自然樊篱，八成珍贵装载物的变质。然而，这种膜的存在使外泌体难以高效装载药物等外源性因素。通过物理或化学技能、生物工程时间的改进，不错提高自然外泌体对药物的装载效用。此外，针对外泌体外膜的工程化修饰，不错改善外泌体在体内的生物分散，提高其靶向性与调治效果。以下回顾了外泌体装载药物的策略，并针对卵白质/ 多肽类药物和小核酸类药物的外泌体装载形态进行了筹商。4.2.1 载药策略外泌体装载药物的策略可分为两种。一种为外源性载药路线，即先将外泌体索求纯化，再将调治药物包载于外泌体中，其优点是制备浅显。面前，常用的外源性载药要领包括电穿孔法、共孵育法、超声法、化学转染法及反复冻融法。然而，外源性药物装载也存在一定劣势，欧美亚洲国产bt如在装载过程中可能会紧闭外泌体的无缺性，况兼需要额外的纯化重要往来除未被外泌体拿获的药物。另一种为内源性载药路线，即通过基因工程时间处理或共孵育，将标的分子（如核酸、卵白和化学药物）先引入供体细胞，再包装进外泌体中，随后外泌体从供体细胞分泌，终末通过折柳提纯回收已载药的外泌体。内源性载药的优点是保留了外泌体的无缺性和功能，但操作复杂且履行周期长、制备老本高。4.2.2 卵白质多肽类药物的装载卵白质和多肽类药物适用于多种疾病的调治，包括肿瘤、糖尿病、自身免疫性疾病、神经系统疾病等。然而，由于其复杂的结构和生理活性，卵白质和多肽类药物对药物寄递系统提议了较高的要求。诳骗外泌体装载卵白质/多肽类药物，其装载效用易受供体细胞和受体细胞的影响，且部分自然外泌体存在靶向性不彊等舛误。因此，竣事对药物的精确靶向寄递和灵验提高药物荷载量，已成为现时卵白质/多肽类外泌体药物研发亟需科罚的问题。“支架卵白”挂载是一种弥留的外泌体卵白质/多肽类载药时间。“支架卵白”是与外泌体拼装关连的、自然高抒发的一类外泌体特征卵白质。“支架卵白”挂载时间通过将特异性卵白/多肽组分与“支架卵白”聚拢，组成交融卵白，从而提高药物在外泌体中的灵验荷载量及外泌体的靶向性。2020 年发表的一项科研效果报说念了2种新式“支架卵白”，即 PTGFRN 和 BASP1。筹商发现，在外泌体供体细胞中将标的卵白[ 如细胞因子、抗体片断、RNA 联接卵白、疫苗抗原、Cas9 和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）等]与 PTGFRN 或 BASP1 交融抒发，不错将需要寄递的卵白质或多肽类药物搭载在外泌体膜的外侧或内侧，这是一种新式、高效、安逸的外泌体内源载药形态。4.2.3 小核酸药物的装载外泌体是细胞开释的最小的细胞外囊泡之一，已被解释不错捎带不同的核酸，其中包括microRNA。每个外泌体含有大要 3 000个microRNA 分子，这些 microRNA 通过转录后遏制基因抒发来调整细胞的滋长和代谢。外泌体 microRNA 是癌症-宿主串扰的弥留介质，癌细胞开释的外泌体 microRNA 不错调整迢遥细胞的功能和表型，尤其是通过促进肿瘤微环境中不同细胞间的互相作用，从而影响肿瘤滋长、侵袭、转机、血管生成和耐药性。从肿瘤调治的角度来看，外泌体不错被视为传递 microRNA 的靶向寄递载体，其在肿瘤组织中高效、特异域调整靶基因的抒发，进而起义肿瘤调治产生积极作用。常用的将 microRNA 药物装载到外泌体中的要领包括共孵育、电穿孔、超声、转染等。4.3 外泌体载药在大范围分娩和纯化中的近况与问题行为细胞产物的生物成品，外泌体家具的质料与宿主细胞的质料关系密切。药用外泌体制剂必须经受 GMP 级别的分娩过程，以确保其生物功能。在 GMP 方面，本文主要筹商三大重要：细胞培养系统上游（包括起原和工艺放大问题，其中外泌体起原已在前文筹商）、纯化系统下流和外泌体质料适度。此外，外泌体的剂型对家具的疗效和安全性有弥留影响，在分娩过程中需要介怀采用合适的剂型。4.3.1 工艺放大问题外泌体药物从小范围研发扩张到工业化范围分娩，并投入后续临床纯熟的过程中，临床级外泌体的大范围分娩是一项弥留挑战。外泌体的产量高度依赖于其供体细胞，受限于不同细胞分泌外泌体的能力以及大范围细胞培养的疼痛与高老本。对于药用外泌体行业，其工业化水平仍处于起步阶段。到面前为止，外泌体分娩的升级尝试主要集会在中袖珍的“扩大范围”策略上，通过培养瓶、细胞工场或中型生物反应器分娩 8 ~ 10 L 的外泌体供体细胞。开发和优化恰当 GMP 圭臬的外泌体大范围制备工艺对于临床筹商诡计和畴昔市集供应皆相配弥留。此外，探索八成保握外泌体活性的储存条款也至关弥留。外泌体的活性可能受到储存容器和环境因素等的影响，因此在分娩过程中必须经受八成保握外泌体活性的储存条款。建议使用硅化罐储存，况兼对容器进行测试，以幸免外泌体黏附在名义。外泌体的存储形态包括冷冻（－20℃、－80℃）、真空干燥和液态保存（4℃）。尽管已有一些筹商标明不同的储存条款对外泌体的功能存在影响，但外泌体保存条款的圭臬仍未有长入定论，而添加药物则使保握外泌体制剂安逸性变得愈加复杂。4.3.2 纯化问题外泌体大范围折柳要领的低效性是临床级外泌体开发的另一个辛劳。不同类型细胞开释的外泌体在数目、物理化学特征和组成上可能存在相反。不同的折柳提纯要领所得到的外泌体产量差距悬殊，外泌体亚群也有所不同。外泌体分散在极其复杂的体系中，单一要领很难取得高纯度的外泌体，因此需要联接外泌体的不同物理化学和生化特质，经受多种要领结伙进行折柳纯化，这使得高产量的外泌体折柳纯化变得相配具有挑战性。面前，基于不同旨趣的时间已被用于外泌体折柳，包括超速离心法、超滤法、免疫亲和层析、基于电荷中庸的团聚物千里淀法、尺寸排阻色谱、微流体时间、切向流过滤等。尽管筹商东说念主员也曾开发并优化了一些外泌体纯化要领，但面前仍然很难以一种特定的要领科罚悉数关连的挑战，如折柳效用低、样品亏损、外泌体回收率和纯度低，以及批次间相反等问题。4.3.3 质料检测要领和圭臬的问题在质料适度方面，全面表征外泌体至关弥留。鉴于外泌体的异质性，分娩得到的外泌体可能存在均一性差的问题，为了确保外泌体终家具恰当先前详情的重要质料属性，在筹商外泌体的过程中，不能幸免地需要对外泌体进行表征分析和质料适度，包括粒径和浓度测定、微生物和病毒因子等稠浊物检测、残留物检测、载药量评估和生物学功能检测，以评估外泌体的调治活性与均一性。面前，外泌体的质料检测名目主要集会在粒径、颗粒数、名义卵白质记号物及负载物等方面。在骨子应用方面，外泌体行为药物寄递载体受到装载效用不能控的舍弃，因此，明确的装载效用运筹帷幄有诡计对于评估载药系统的安逸性和药物载量是十分必要的。装载效用可通过径直运筹帷幄或盘曲运筹帷幄来详情，盘曲运筹帷幄是指从总药物含量中减去游离药物含量来预见外泌体负载的药物量，而径直运筹帷幄频频需要外泌体裂解和药物索求等重要来量化负载药物。高质料的外泌体表征与量化八成对外泌体载药系统的潜在药效进行预测，然而，迄今为止尚无外泌体量化以及理化特征形容的行业“金圭臬”，寻找和开发外泌体表征与定量要领亦然现时亟待科罚的问题。4.3.4 外泌体剂型对家具化的影响面前市集上的外泌体家具主要分为 3 种剂型：冷冻体式的外泌体、液体体式的外泌体复配液和粉剂体式的外泌体冻干粉。冷冻外泌体主要用于履行室筹商，其保存要领和应用参考了细胞的冷冻保存要领，对科研东说念主员的操作手法和相应的拓荒要求较高，且冷冻复融将变成活性的多半丢失，因而重复性较差，制变成品率较低，不得当大范围分娩。外泌体复配液是将外泌体悬浮在液体基质中，幸免了使用过程中反复冷冻复融变成的活性亏损，然而在常温下，外泌体内的活性因素易降解，难以得志恒久储存及资料输送的要求。冻干工艺不错将外泌体冻干成固体以竣事保存效果，现时冻干时间已被用于改善用作药物寄递载体的脂质体的恒久安逸性。因此，冻干时间有后劲改善外泌体的保存安逸性，淌若冻干的外泌体不错在室温条款下安逸保存，冻干时间将大大拓展外泌体的应用范围。在外泌体冻干工艺开发方面，需要重心科罚的是冻干保护剂及缓冲体系的采用，同期冻干工艺的参数也会影响冻干效用及冻干后外泌体的无缺性，这少量也需要重心存眷。此外，畴昔需要对含核酸（如microRNA）的外泌体进行更详备的评估，并探讨冻干对其安逸性的影响。5 外泌体载药的关连律例问题现时，将外泌体推向临床调治仍濒临多重挑战。一是外泌体供体细胞的采用，采用自体细胞照旧具有低免疫原性的同种异源细胞，这需要顺从关连律例和伦理审查要求，包括取得适当的临床纯熟批准、知情容许和秘密保护，并顺从监管机构的国法；二是药物装载和开释形态的详情，需要针对不同药物详情最好的装载要领和条款，优化外泌体与药物之间的互相作用，以确保药物的安逸性和适当的开释速度；三是靶向输送和组织定位能力的改善，需要开发得当临床应用的名义修饰策略，如使用靶向肽、抗体或其他分子，让外泌体八成特异性地联接到靶细胞或组织上。在分娩制备方面，外泌体制剂必须顺从 GMP 律例，其中包括上游外泌体起原采用、大范围细胞培养时间、下流外泌体折柳纯化以及悉数这个词分娩过程的质料适度等方面的范例。面前，国表里均未出台针对外泌体家具安全性、灵验性和质料可控性的监管律例，亟需范例的要领和原则来填补这一空缺。2022 年 10 月 31 日，国度药品监督管制局（National Medical Products Administration，NMPA）食物药品审核稽察中心发布《细胞调治家具分娩质料管制指南（试行）》（以下简称《指南》），是我国在细胞调治策略监管方面迈出的要紧一步。《指南》带领药品上市许可握有东说念主范例开展细胞调治家具的分娩和质料管制，保证家具性量，同期，这也为细胞调治家具研发企业提供了更明晰的研发、分娩和发展旅途。细胞制备应恰当《中华东说念主民共和国药典》、《药品分娩质料管制范例》、《药品注册管制办法》、《药品分娩监督管制办法》、《药品分娩质料管制范例》过甚附录、《药品注册核查管制国法》、《药品不良反应回报和监测管制办法》、《药品调回管制办法》、《药品证据书和标签管制国法》、《药品分娩企业现场稽察风险评定原则》、《医疗废料管制条例》与《病原微生物履行室生物安全管制条例》中的关连国法。面前新药陈诉要求苦求东说念主注明家具中悉数能引起药理作用、代谢作用或免疫反应的物资，况兼最终配方中的非活性因素（辅料）也应给以陈诉。根据国际细胞外囊泡学会（International Society for Extracellular Vesicles，ISEV）在 2014 年的提议及 2018 年的补充建议，淌若能将药物的举座疗效归因于外泌体装载的药物，而非外泌体载体自己，就能将外泌体看作是药物载体，即按辅料进行陈诉。在这种情况下，只需对外泌体进行安全评价，而无需叙述其自己的功能和机制。淌若新药的安全性、质料等目标恰当要求，况兼八成针对该药物的作用机制提供科学可靠的凭据，即可获批开展临床纯熟。外泌体的起原丰富种种，要将同种异体外泌体、异种外泌体转机为临床上安全、灵验的调治家具，就必须对供体细胞的采用、外泌体折柳纯化、制剂制备、质料适度等分娩重要进行握续的监控，全面评估家具的药理活性过甚免疫学和致癌效应，严格把控微生物稠浊等风险。若何筛选合适的检测技能，是决定外泌体制剂是否能竣事其临床应用的一个要紧课题。当下，国内尚未出台针对外泌体安全性和灵验性检测圭臬的带领认识，亟待通过完善已有的检测技能或寻求新的检测技能来考据外泌体载药的安全性与灵验性。6 外泌体国表里筹商概况近 10 年来，国表里学者对外泌体在疾病调治中的应用进行了多半筹商。外泌体具有生物安全性高、靶向性强和安逸性高级优点，被平凡筹商用于多种疾病尤其是肿瘤的调治。面前，Web of Science 数据库中有近 3 万篇与外泌体关连的文件（包括期刊文件与专利文件），其每年发表数目跟着时刻的推移呈安逸的指数增长，同期也预示着外泌体行业的细密出息（见图2）。 在昔日的 5~6 年里，外泌体行为潜在的药物载体比脂质纳米颗粒（lipid nanoparticle，LNP）更受迎接。自 2018 年起，与外泌体关连的文件数目，包括专利文件和期刊文件，均已显赫逾越脂质纳米颗粒（见图 3）。 根据好意思国化学文摘社（Chemical Abstracts Service，CAS）发布的 2023 年度外泌体行业回报数据，外泌体筹商的重要参与国度——好意思国、中国、韩国和日本在该筹商方面处于上风地位，与该主题关连的已发表期刊文件和专利文件数目最多。在外泌体关连专利数目方面，企业和学术机构之间等分秋色。MD Healthcare、Codiak Biosciences 和 Onco Therapy Science 是悉数公司中领有最多专利的企业，而加利福尼亚大学、路易斯维尔大学和浙江大学是优秀的学术机构。在专利分散方面，世界常识产权组织（World Intellectual Property Organization，WIPO）收到的专利苦求最多，其次是好意思国专利商标局（United States Patent and Trademark Office，USPTO）和中国国度常识产权局（China National Intellectual Property Administration，CNIPA）、欧洲专利局（European Patent Office，EPO）、韩国特准厅（Korean Intellectual Property Office，KIPO）和日本特准厅（Japan Patent Office，JPO）。2022 年 5 月10 日，国度发改委印发《“十四五”生物经济发展运筹帷幄》，外泌体调治家具初次投入国度经济发展运筹帷幄。“生物经济更变能力提高工程”专栏对于“重要共性生物时间更变平台缔造”中提到：“围绕加速更变药上市审批、强化上市后监管，缔造药品监管科学筹商基地，缔造抗体药物、交融卵白药物、生物仿制药、干细胞和细胞免疫调治家具、基因调治家具、外泌体调治家具、中药等质料及安全性评价时间平台。”在国度策略的守旧下，国产外泌体产业发展将迎来新时间，外泌体产业蓄势待发，畴昔可期。7 结语与瞻望外泌体因其独到的特质过甚在生理和病理过程中的平凡作用，已成为药物寄递和会诊范围的后发先至。外泌体行为自然纳米载体的应用出息是广袤的，其在化妆品、医好意思和食物等范围中的潜在应用也在探索中。然而，外泌体的临床转机濒临着诸多问题与挑战：种种常见细胞均可用于外泌体分娩制造，细胞的代数及培养血清等因素的变化也会导致外泌体的不同；扩大细胞培养范围是多半分娩外泌体最径直的要领，不同的索求要相识影响其产量以及外泌体亚群的均一性，细胞培养的范围化以及折柳索求过程需要圭臬化；及格的体外在征与量化不错预测载药外泌体系统的预期调治后劲，需要进一步寻找与开发外泌体量化过甚分子和物理特征形容的“金圭臬”；外泌体家具需要额外规范进行把控，以确保外泌体终家具得志重要质料属性；冷冻干燥最成心于外泌体类调治药物的贸易化；监管机构于今尚未发布若何测试外泌体安全性和灵验性的带领认识，需要对现存的要领进行改进或寻找新要领，从而对外泌体的安全性和灵验性进行解释。外泌体行业的发展还处于早期阶段，其领有着巨大的发展机遇，也濒临着产业化的挑战。不错笃信，新式平台和先进时间的开发，以及制药企业和科研机构的不懈探索必将加速外泌体基础筹商和临床转机，造福雄伟患者。  [作家先容] 高博：本科毕业于西安交通大学生物工程专科，硕士毕业于武汉大学病毒学专科，博士毕业于复旦大学神经生物学专科。2006—2015 年在上海吉凯基因化学时间有限公司任分公司司理，风雅重组病毒载体的开发和分娩管制。2016 于今任上海宇玫博生物时间有限公司 CEO，风雅外泌体家具的开发和工艺研发，包括折柳纯化、检测果决、载体符号、药物装载等工艺开发。参与多项国度、省市课题名目，领有 18 项已授权发明专利，苦求中的专利有 30 多项，参与发表了多篇 SCI 论文。  Umibio 也曾搭建了GMP 级高纯度外泌体索求纯化平台和外泌体药物寄递筹商平台，期待与诸位同仁共同开发，分享效果。面前寻觅深度互助伙伴中，迎接征询。  此外，行为外泌体科研家具优质供应商，咱们有一系列的家具，供您采用，迎接代理加盟，面前家具客户文件也曾接近 300 篇，遍布世界，是您想象的采用。 麻豆视频